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创伤弧菌核酸检测试剂盒(恒温荧光法)使用说明书
点击次数:1632 发布日期:2018-7-13  来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责任自负

江苏快三开奖结果今天 www.32lyk.cn   创伤弧菌核酸检测试剂盒(恒温荧光法)

◆ 产品说明

致病菌检测系列基于独特的恒温荧光检测技术,可针对食品、饲料等样品中的致病微生物的特异核酸片段进行扩增,仪器实时监测扩增过程中的荧光信号变化,自动判读结果。本产品用于创伤弧菌的检测。检出限为103 CFU/ml。 

◆ 产品组成(96测试)

011021L

试剂

含量

A-VV-I

1200μL × 2支

B-I

  55μL × 2支

C-I

1200μL × 2支

NG-I

  50μL × 3支

PG-VV-I

  50μL × 2支

◆ 适用仪器

   Dhelix 1610、Dhelix 3210、ESE Tube Scanner、Genie II、Deaou-308c等恒温荧光检测仪,ABI 7500,LightCycler480,CFX 96等荧光PCR仪。

◆ 自备耗材和仪器

①灭菌1.5mL或2.0mL离心管;②灭菌0.2mL PCR管或八联管;③冰盒;④移液器(0.5-10μL,10-100μL,100-1000μL)及配套灭菌吸头;⑤离心机;⑥涡旋混匀器;⑦金属浴

◆ 注意事项

1.本试剂检测灵敏度高。为了防止污染,实验要分区操作。

   1)第一区:试剂准备区。

   2)第二区:样本制备区。

 3)第三区:模板添加区。

   4)第四区:扩增及产物分析区。

   ★ 分区之间最好进行物理性隔离,避免人为因素造成的污染。

2.实验过程中穿戴工作服和乳胶手套,不同区域独立使用工具,需更换手套和实验服。

3.严格按照操作步骤操作,试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰盒上操作。

4.反应液中的成分对光敏感,应避光保存。试剂使用前要完全解冻,但应避免反复冻融,推荐使用前离心30秒,并按检测频次将反应液以适当体积分管保存。

5.反应结束后,扩增管请置于密封袋内丢弃,当日清理,开盖易造成气溶胶污染,禁止开盖。

6.不同批号试剂请勿混合使用,在有效期内使用。

7. 检出限为103 CFU/ml是以1 ml 103 CFU/ml增菌液离心后收集菌体再提取的细菌基因组DNA作为模板。

◆ 样品处理

参照 《NMKLNo.156 》处理样品,对样品进行前增菌,制备的菌液保存待用。

以无菌操作取检样20 g(ml),加入2%氯化钠碱性蛋白胨水200 ml,用旋转刀片式均质器以8000 rpm均质1 min,或者拍击式均质器拍击2 min,充分振荡后于42℃ ± 1℃培养18 h±2 h。

详细步骤请按照标准操作或查阅食安通软件。

◆ 实验操作

将试剂完全解冻,各组分离心30s。

1. 试剂配制(试剂准备区,放置于冰盒中进行):

若有N个待检样品,则参照下表,按照N+2个数量计算各组分用量(N个待检样品+1个阴性对照+1个阳性对照),将反应液置于0.6ml或者1.5ml离心管中,涡旋混匀,离心30秒,分装于0.2ml PCR管中,并向每管加入1滴C-I(约20μl)。

试剂

使用量

A-VV-I

22×(N+2)μL

B-I

 1×(N+2)μL

反应液总体积

23×(N+2)μL

  1. 模板制备(样本制备区)

建议使用试剂配套细菌组DNA提取系列产品,具体过程详见产品说明书。

3.添加模板(模板添加区,放置于冰盒中进行)

       在步骤1中已含有反应液的PCR管中加入2μL模板,顺序为NG-I、待测样品模板、PG-VV-I。涡旋混匀30s,离心1min,立即进行扩增反应。

4. 扩增反应(扩增及产物分析区)

①恒温仪器63℃条件下反应30 min。

②若使用荧光定量PCR仪,则荧光基团选择FAM,淬灭基团选择None,将63℃ 15 s,63℃ 45 s作为一个循环,于63℃ 45 s处收集荧光信号,30个循环。 

   其他仪器请参照仪器说明书进行设置。

◆ 结果判定

①仪器自动判定结果,若显示“阳性”,则样品中含有创伤弧菌;若显示“阴性”,则样品中不含有创伤弧菌或含量低于检测限。

②在荧光定量PCR仪上,根据有无“S”型扩增曲线判定结果。若有“S”型扩增曲线,则样品中含有创伤弧菌;若无“S”型扩增曲线,则样品中不含有创伤弧菌或含量低于检测限。 

  • NG反应管结果显示“阴性”,PG反应管结果显示“阳性”,此次检测结果有效,否则无效。如重复检测结果仍为无效,请与技术支持人员联系。
来源:上海一基实业有限公司
联系电话:021-61119791
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